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關于血清的一些問題 | ||||
日期:2012/5/29 訪問: | ||||
血清是細胞培養中最重要的元素之一。因此,我們特別整理了一些實驗室里常會遇到的問題,供大家參考:
1. 存放血清最好的方法? 我們建議血清應保存在-20℃以下。然而,若存放于4℃時,請勿超過半個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。 2. 如何解凍血清才不會使產品質量受損? 我們建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,溶解過程中必須規則地搖晃均勻。 3. 血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理? 血清中沉淀物的出現有許多種原因,但最普遍地原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖素蛋白(形成凝血地蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。 若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議你以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。 4.為什么要熱滅活血清? 加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。 5.有必要做熱滅活嗎? 實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的 。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的活性,而造成細胞生長速度的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是微生物的分裂擴增。 因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此以來,不但節省你寶貴的時間,更確保血清的質量。 6.如何避免沉淀物的生產? 我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作: ⑴.解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。 ⑵.解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻使溫度及成分均一,減少沉淀的發生 ⑶.請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。 ⑷.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。 ⑸.若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高、時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多 | ||||
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